DNA酶与DNA聚合酶有形成方式、模板和用途三个区别：
1、形成方式不同
DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。DNA连接酶都不能催化两条游离的DNA链相连接。
DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键。dna聚合酶起到催化剂的作用，催化原来的dna进行复制，然后将原来的dna和复制以后的dna进行模板配对后，连接聚合在一起，就可以形成新的dna链。
2、模板不同
DNA连接酶不需要模板，因为DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。用DNA连接酶连接具互补粘性末端的DNA片段或是用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来。
DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链。DNA聚合酶的结构是三磷酸腺苷。
3、用途不同
DNA连接酶主要用于基因工程，将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合，故也称“基因针线”。如基因工程中，大肠杆菌连接酶连接黏性末端，T4连接酶既可连接黏性末端，又可连接平末端。
DNA聚合酶在DNA复制中起做用，主要是连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。
参考资料：
百度百科-DNA连接酶
百度百科-DNA聚合酶
DNA聚（DNA polymerase）是细胞复制DNA的酶。DNA聚合酶 , 以DNA制模板，从将DNA由5'开始复3'端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具备模板、引物、dNTP等的情况下）及其相辅的活性。
DNA连接酶（DNA Ligase）也称DNA黏合酶，在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色，那就是连接DNA链3‘-OH末端和，另一DNA链的5’-P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。连接酶的催化作用需要消耗ATP。
不是
DNA聚合酶和DNA连接酶作用的位点都是3'5'磷酸二酯键；但DNA连接酶是作用在游离的DNA片段间，使其连接成为一条完整的DNA链，而DNA聚合酶则是将游离的脱氧核糖核苷酸连接成DNA片段。
DNA聚合酶只能将2113核苷酸加到已有5261酸片段的3端4102的羟基上1653成膦酸二脂键专DNA连接在属两个DNA片段之间形成膦酸二脂键,不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成膦酸二脂键。 DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过膦酸二脂键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。
二者的区别在于作用的底物：DNA连接酶与DNA聚合酶都是形成磷酸二酯键。但DNA连接酶连接的是DNA片段（比如冈崎片段）；DNA聚合酶是将单个脱氧核糖核苷酸按顺序连接到DNA链上。
